Nīnau pinepine ʻia ʻo Cell Culture

2. He aha nā mea palekana e pono ai ke lawe ʻia i ka wā e wehe ai i nā cell mai ka wai nitrogen no ka hoʻihoʻi hou ʻana?

ʻO nā cryotubes pūnaewele i loko o ka wai hauʻoli i hoʻopaʻa ʻole ʻia a loaʻa i ka wai naikokene e kahe ana i loko o lākou hiki ke hoʻoulu i ka pahū inā piʻi ka wela o ka cryotube i ka wā e hoʻoheheʻe ai.No laila, ʻōlelo ʻia e hoʻohana ʻia nā maka aniani a me nā mīkina lima pale i ka wā e wehe ai i nā cell mai ka wai nitrogen.No ka ho'ōla hou ʻana, pono e hoʻoluliluli mau ʻia ka paipu maloʻo i loko o kahi ʻauʻau wai 37°C no ka hoʻoheheʻe ʻana i ka wai hau i loko o 1-2 mau minuke.Ma hope iho, e holoi i waho o ka paipu me ka waiʻona holoi, a laila e lawe i loko o ka papaʻaina ultra-maʻemaʻe a hoʻoneʻe i nā cell i kahi pahu centrifuge me 10 ml o ka moʻomeheu i hoʻohui ʻia, centrifuge ma 1000 rpm no 5-10 mau minuke, e hoʻolei i ka. supernatant, hoʻohui i ka nui kūpono o ka moʻomeheu moʻomeheu a inoculate i ka moʻomeheu a hoʻokomo i loko o ka 5% CO2 incubator.

3. No ke aha e hoʻopaʻa ʻia ai nā pūnaewele i loko o ka māhele mahu o ka pahu hau hau wai ma mua o ka manawa wai?

Hiki ke ola hou nā pūnaewele i mālama ʻia i loko o ke kinoea.ʻOiai i ka manawa wai o ka naikokene wai, inā ʻaʻole i hoʻopaʻa pono ʻia nā paipu lyophilisation a i ʻole nā ​​leaks, hiki ke hoʻopili pololei ʻia ma waena o nā pūnaewele a me ka naikokene wai ke hoʻololi i ka ola o nā cell ma hope o ka hoʻoheheʻe ʻana.

4. No nā pūnaewele hoʻokuʻu, pehea wau e hoʻololi ai i ka moʻomeheu moʻomeheu?

Hiki ke hana ʻia ka hoʻoulu ʻana i nā pūnaewele hoʻokuʻu ʻia ma ka hoʻohui ʻana i ke ʻano mea hou (inā ʻae ʻia ka lewa) a i ʻole ma ka hoʻokaʻawale ʻana i nā keena mai ka mea kahiko ma ka centrifugation (100 xg no 5 mau minuke) a laila hoʻomaha hou i nā cell precipitated i loko o ka mea hou.Eia nō naʻe, no ka hapa nui o nā laina kelepona hoʻomaha, ʻoi aku ka maikaʻi o ka hoʻohui ʻana i ka medium.ʻO kēlā me kēia ʻaoʻao, pono e hoʻoponopono hou ʻia ka mea waena ma mua o ka hiki ʻana o nā cell i ko lākou nui saturation density.ʻOkoʻa ka mānoanoa saturation o nā cell ma waena o 3 x 10 5 a me 2 x 10 6 ma muli o ka laina kelepona a me nā kūlana moʻomeheu (hoʻomaha a hoʻoulu ʻia, pae oxygenation, etc.).Pono e hoʻoheheʻe ʻia nā cell i kahi haʻahaʻa haʻahaʻa haʻahaʻa e hiki ai i ka hoʻihoʻi ʻana i ka meaʻai kūpono e mālama i ka ulu ʻana o nā cell i ka logarithmically.Inā hoʻololi wale ʻia ke ʻano me ka hoʻohaʻahaʻa ʻole i ka nui o ke kelepona, e hoʻopau koke nā cell i ka medium a make.Inā hoʻoheheʻe ʻia nā cell ma lalo o ko lākou liʻiliʻi liʻiliʻi, e komo lākou i kahi pae lag a ulu mālie a make paha.Loaʻa i kēlā me kēia laina kelepona hoʻokuʻu ʻokoʻa ka nui saturation a me ka wā hele, no laila ʻo nā helu kelepona i kēlā me kēia lā ke ala e nānā ai i nā laina kelepona hoʻokuʻu *.

5. He aha ka pae CO2 i manaʻo ʻia no ka moʻomeheu cell?

ʻOiai ka pae CO2 i loko o nā ʻōnaehana moʻomeheu cell mai 0.03% a 40% (maʻamau ma kahi o 0.03% CO2 i ka lewa), he mea maʻamau ka loaʻa ʻole ʻana o CO2 i ka lewa a i ʻole ka manaʻo CO2 o 5% a 10%.He mea nui e hoʻololi i ka ʻike o ka sodium bicarbonate i loko o ke kikowaena e kaulike me ka pae CO2 i ka pae kinoea.Hoʻopuka nā pūnaewele i ka CO2 a koi i kahi liʻiliʻi o ka carbonic acid no ka ulu a ola.Inā ʻaʻohe CO2 i hoʻohui ʻia a hoʻonui ʻia nā cell, 4 mM (0.34 g/L) o ka sodium bicarbonate anhydrous hiki ke hoʻohana.Eia naʻe, pono e hoʻopaʻa ʻia ke poʻi o ka ipu moʻomeheu i kēia manawa.Inā makemake ka ʻōnaehana moʻomeheu i ka 5% a i ʻole 10% CO2, e hoʻohana i ka 23.5 mM (1.97 g/L) a i ʻole 47 mM (3.95 g/L) sodium bicarbonate ma 37°C, me ka pH mua ma kahi o 7.6.Ma lalo o kēia mau kūlana, pono e waiho ʻia ka pahu me ka uhi ʻole ʻia a i ʻole e hoʻohana ʻia kahi ipu Petri e mālama i ka equilibrium kinoea.

6. No ke aha e pono ai i kekahi mau pūnaewele ka sodium pyruvate?ʻEhia ka nui o ka sodium pyruvate e pono iaʻu e hoʻohui i ka medium?

ʻO ka Pyruvate he mea hoʻopuehu waika ma ke ala glycolytic * e komo koke a haʻalele i ke kelepona.No laila, ʻo ka hoʻohui ʻana o ka sodium pyruvate i ke kikowaena e hāʻawi i kahi kumu ikehu a me kahi kumu kalapona no ka anabolism, kōkua i ka mālama ʻana i kekahi mau cell kikoʻī, kōkua me ka cell cloning a i ʻole ke koi ʻia ke hoʻemi ʻia ka nui o ka serum i loko o ke kikowaena.Kōkua pū ka sodium pyruvate e hōʻemi i ka cytotoxicity i hoʻokomo ʻia i ka fluorescence.Hoʻohui pinepine ʻia ʻo Sodium pyruvate i ka ʻike hope loa o 1 mM.ʻO nā haʻina sodium pyruvate i kūʻai ʻia ma ke kūʻai ʻana he 100 mM hoʻonā (100X).

Unuhi ʻia me www.DeepL.com/Translator (mana manuahi).